MARIO - Ecco tornare in grande spolvero il nostro eroe! Mario, manco a dirlo, parte per salvare capra e cavoli (leggasi Principessa Peach e regno dei funghi) dalle grinfie del solito Bowser. Per farlo dovrà affrontare un'avventura gigantesca, strutturata in 8 vasti mondi! Le sue abilità sono le solite di sempre: correre e saltare, più qualche chicca particolare a seconda del costume posseduto.

 LUIGI - Luigi curiosamente torna ad essere pixellosamente identico al fratello (in SMB2, invece, era diverso) tranne che per il colore verde. Il povero e tremebondo Gigi compare solo se c'è anche un secondo giocatore...che vita avara di soddisfazioni per l'uomo verde!

 PEACH - Peach, come sempre, è la vittima di turno. E' stata rapita da Bowser e rinchiusa nel suo castello...ancora una volta!

 TOAD - I fedeli funghetti questa volta recitano una parte più importante del solito (o perlomeno si rendono utili): se andrete a trovarli nelle loro casette vi regaleranno un oggetto da usare sulla mappa!

 BOWSER - Il cattivo re dei koopa è tornato! Bowser ha mandato i suoi sette figli (alla loro prima apparizione) a rubare 7 bacchette magiche ai re di 7 regni, e a trasformare i suddetti re in...animali! E come se non bastasse, mentre Mario è assente per salvare i re rapisce Peach! Un piano diabolico e premeditato.

 FIGLI DI BOWSER (KOOPALINGS) - Ecco i 7 figli di Bowser alla loro prima apparizione: Iggy, Morton, Wendy, Larry, Roy, Lemmy e Ludwig. 7 tipetti tosti, ognuno dotato di un'abilità particolare, che Mario dovrà affrontare per riportare la pace nel regno dei funghi! Ognuno di loro è a capo di uno dei 7 mondi.